既然是天然的,顾名思义就是从天然薄荷上面提取的一种精油,纯度比较高,吉安万亿香料就是专门做这类的,详细可以找他们了解下。
质粒提取的主要步骤是什么及其作用 分子生物学
如今提取质粒主要用的还是碱裂解法提取。
原理可以进上面的链接看。
操作步骤: 本实验方法适用于从 1-10ml 过夜培养的大肠杆菌菌液中提取质 粒。提取量受菌株、质粒拷贝数、菌液体积和培养时间、培养基类型 等因素的综合影响
1. 收菌:将过夜培养(37℃,12-16 小时)的菌液于室温≧10,000g 离心 1-2 分钟,彻底弃除上清。注意:高拷贝质粒建议使用≦5ml 菌液;菌液用量过大不仅不能增加质粒产 量, 反而会因裂解不完全或杂质封闭硅胶膜而降低产量;培养时间不宜过a686964616fe58685e5aeb长, 否则会增加开环结构质粒的比例。
2. 重悬:加入 250µl 含 RNase A 的细胞悬浮液(S1) ,充分混悬震荡 或用枪头反复抽打使细菌彻底分散悬浮
3. 裂解:加入 250µl 细胞裂解液(S2) ,轻轻上下颠倒混合 5 次,室 温静置 1-5 分钟,待细菌充分裂解,溶液变半透明。
注意:避免剧烈震荡导致基因组 DNA 裂解,裂解时间不能超过 5 分钟。
4. 中和:加入 350µl 中和缓冲液(S3) ,轻轻上下颠倒混合 5 次,充 分混匀,避免剧烈震荡。室温下≧12,000g 离心 10 分钟。
5. DNA 结合:小心吸取上清,转移到插入收集管的离心吸附柱内,室 温下≧12,000g 离心 1 分钟,弃除收集管中的废液,将离心吸附柱 重新插回收集管中。
6. 清洗:加入 500µl 漂洗液 (WB,请确认已加入乙醇! )于离心吸附 柱中,室温下≧12,000g 离心 30 秒,弃除收集管中的废液,将离 心吸附柱重新插回收集管中。
7. 再次清洗:加入 500µl 漂洗液 (WB)于离心吸附柱中,室温下≧ 12,000g 离心 30 秒,弃除收集管中的废液,将离心吸附柱重新插回收集管中。将离心吸附柱开盖再次离心 2 分钟,彻底除去残余 漂洗液。
8. 洗脱:小心取出离心吸附柱,将其套入一个新的 1.5ml 灭菌离心 管中。向硅胶吸附膜的中央加入 100µl 洗脱缓冲液(EB) ,室温放 置 1 分钟后,≧12,000g 离心 1 分钟收集质粒 DNA。
注意:为提高质粒浓度,最低可使用 30µl 的 EB 溶液,离心收集后壳将洗脱 的质粒溶液再次加入离心吸附柱中重复洗脱;使用 100µlEB 溶液则无需二次 洗脱;对 6kb 以上的质粒,可使用预先加热至 55℃的 EB 溶液洗脱以提高产 量;EB 溶液不含 EDTA,故不会影响荧光测序等后续反应;如必须使用无菌去 离子水洗脱, 需注意其 pH 值是否接近中性,否则应使用 NaOH 溶液将 pH 值调 节至 7.0-8.5 之间。
9. 储存:弃除离心吸附柱,纯化的质粒可直接用于后续反应或于 -20℃长期保存。
注意:经检测,本试剂盒从 endA¯菌株(如 DH5α ,TOP10,XL1-blue 等)中 提取的质粒反复冻融 20 次无降解;如需在 4℃长期保存或者保存从 endA+菌 株(如 JM109,HB101,BL21 等)中提取的质粒,可向每 100µl 质粒溶液中加 入 11µl 的 10×TE
若有,望采纳!!!
但是缺乏对其他观点的充分评估。